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凝胶色谱柱的基本介绍无压缩999doc文库999doc

发表时间:2024-02-26 10:28:21 来源:新闻动态

  1、引言由于水源日益受到污染,水中的有机物含量和种类都明显增多,传统给水处理工艺不能对其有效去除,对人体的健康造成了威胁。许多研究试验得出:水源的有机物分子量分布随时间、地点产生较大的变化,三氯甲烷的生成量与腐殖酸的分子量分布有着密切的关系而且有机物的分子量分布有着强烈的地域特性。了解水源分子量分布的目的是为水处理工艺的选择提供相关依据进而达到最大限度去除有机物。有机物分子量分布的测定方法测定有机物分子量分布主要有两种方法,凝胶色谱法即和超滤膜法,即膜法。凝胶色谱法凝胶色谱法是在色谱柱中装填一定孔径分布的多孔凝胶作为固相。当水流经凝胶时,水中大分子有机物由于没办法进入凝胶。

  这种采用分离柱、抑制柱和电导检测器相结合的离子交换色谱称为离子色谱。为什么凝胶色谱中任何组分的分配系数一定要符合?如果说明什么样的问题解因为组分的分配系数为,分别为组分在固定相和流动相中的浓度,当分子直径大于固定相孔径时,此时,∴。当分子直径小于孔径时,组分向孔隙内流动相扩散,达到平衡时,一半组分在孔隙内,一半在孔隙外,此时,若分子直径介于以上两种极限情况之间,一定介于之间.可见在凝胶色谱中,任何组分的分配系数为,如果,这说明此时的分离方式已不是纯粹的凝胶色谱,其分离过程受到其他作用力如吸附的支配。某人用凝胶色谱分离一高聚物样品,分离情况很差,他改变流动相的组成后。

  2、?相对分子质量大的?溶解度高的?相对分子量小的?所代电荷多的例??蛋白质提取和分离分为哪几步?样品处理、凝胶色谱操作、-聚丙烯酰胺凝胶电泳?样品处理、凝胶色谱操作、纯化?样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定?样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定例??用凝胶色谱法分离蛋白质时,分子量大的蛋白质?路程较长,移动速度较慢?路程较长,移动速度较快?路程较短,移动速度较慢?路程较短,移动速度较快【巩固练习】?凝胶色谱法分离蛋白质的依据是?对其他分子的亲和力?溶解度?所带电荷多少?相对分子质量的大小?选用红细胞作为分离蛋白质的实验材料,有何好

  装填时轻轻敲动色谱柱,使凝胶填装均匀。③洗涤平衡装填完毕后,立即用缓冲液洗脱瓶,在高的操作压下,用??的??的磷酸缓冲液(?为?)充分?小时。)样品加入与洗脱(??)加样前:打开下端出口,使柱内凝胶面上的缓慢下降到与平齐,关闭出口加透析样品①调整缓冲液面:与凝胶面平齐②滴加透析样品:用将?的样品加到色谱柱的③样品渗入凝胶床:④洗脱:打开下端,用磷酸缓冲液洗脱⑤收集:待接近色谱柱底端时,用试管收集流出液,每收集一试管连续收集思考:与其它真核细胞相比,红细胞有什么特点?这一特点对你进行蛋白质的分离有什么意义?血红蛋白是有色蛋白,因此在凝胶色谱分离时可以通过观察颜色来判断什

  多糖是天然高分子中具有多分散性的聚合物,为了鉴定一种聚合物,首先必须测定其分子量与分子量分布,这是高分子化合物的最基本信息参数之一。多糖的理化性质及活性与多糖的分子量及其分化有关。多糖是天然高分子中具有多分散性的聚合物,为了鉴定一种聚合物,首先必须测定其分子量与分子量分布,这是高分子化合物的最基本信息参数之一。多糖的理化性质及活性与多糖的分子量及其分化有关。水相高效凝胶渗透色谱法用于多糖的分子量及其分布的测定,它具有快速、高分辨和重现性好等优点,是多糖类药物分子量测定的较理想质控方法。三、凝胶色谱图的解析实验得到的凝胶色谱图在正常的情况下纵坐标是浓度检测器的讯号,横坐标是洗脱体积。一个典型的高聚物的色谱图如图。

  3、它们的孔径大小有一定的分布,并与待分离的聚合物分子尺寸可相比拟。仪工作流程图如下图所示。当被分析的样品通过输液泵随着流动相以恒定的流量进入色谱柱后,体积比凝胶孔穴尺寸大的高分子不能渗透到凝胶孔穴中而受到排斥,只能从凝胶粒间流过,最先流出色谱柱,即其淋出体积(或时间)最小;中等体积的高分子可以渗透到凝胶的一些大孔中而不能进入小孔,比体积大的高分子流出色谱柱的时间稍后、淋出体积稍大;体积比凝胶孔穴尺寸小得多的高分子能全部渗透到凝胶孔穴中,最后流出色谱柱、淋出体积最大。因此,聚合物的淋出体积与高分子的体积即分子量的大小有关,分子量越大,淋出体积越小。分离后的高分子按分子量从大到小被连续的淋洗出色谱柱并进入浓度检测器。凝胶色谱柱的基本介绍

  4、吸附色谱法常选用的吸附剂有硅胶、氧化铝、(活性炭)和(聚酰胺)等。聚酰胺吸附色谱法的原理为(氢键吸附),适用于分离(酚类)、黄酮类和醌类等化合物。凝胶色谱法是以(凝胶)为固定相,利用混合物中各成分(相对分子质量大小)的不同而进行分离的方法。其中分子量(小)的成分易于进入凝胶颗粒的网孔,柱色谱分离时(后)被洗脱;分子量(大)的成分不易进入凝胶颗粒的网孔,而(先)被洗脱。中药化学成分分子式的确定,目前最常用的是(高分辨质谱)。利用萃取法或分配层析法进行分离的原理主要是利用(物质在两相中的分配系数不同)。硅胶吸附层析适于分离酸性和中性化合物成分,碱性氧化铝用于碱性化合物的分离。

  凝胶过滤色谱测定高分子量聚乙烯醇分子量和分子量分布第期李宇虹凝胶过滤色谱测定高分子量聚乙烯醇分子量和分子量分布凝胶过滤色谱测定高分子量聚乙烯醇分子量和分子量分布李宇虹中国石化集团四川维尼纶厂重庆摘要用凝胶过滤色谱对高分子量聚乙烯醇分子量分子量分布进行剖析采用色谱柱的缓冲溶液流动相流速示差折光检测器柱温聚环氧乙烷作标准物该方法能显着缩短分析时间提高准确性可用于对高聚合度聚乙烯醇进行研究和指导生产关键词凝胶过滤色谱高分子量聚乙烯醇分子量分子量分布中图分类号文献标识码文章编号前言聚乙烯醇是一种用途很广的水溶性高分子聚合物。

  由于各组分物理化学性质的差异,而以不同的速率移动,使之分离。各种色谱分离(吸附、分配、离子交换、凝胶、亲和)的机理是什么?在制备和生产生物体组成成分时怎么样做色谱分离的选择,举例说明。吸附色谱:混合物随流动相通过固定相吸附剂时,固定相对不同物质的吸附力不同使混合物分离的方法。分配色谱(,液液色谱):固定相和流动相均为液相,利用混合物中各物质在两液相中的分配系数不同而分离。离子交换色谱:基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换,混合物中不同溶质对交换剂具有不一样的亲和力而将它们分离。凝胶色谱:以凝胶为固定相,根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术(利用生物大分子的相对分子质量差异进行层析分离的方法)。

  5、聚合物相对分子质量分布的测定多采用实验分级方法来进行。聚合物的实验分级方法和测定主要有三类,它们的比较列于表。表测定聚合物相对分子质量分布的方法凝胶色谱法凝胶色谱法,简称,又称凝胶渗透色谱是目前最广泛应用的方法。一般认为是体积排除机理,因而又被称为体积排除色谱法。当试样随淋洗溶剂进入柱子后,溶质分子即向多孔性凝胶的内部孔洞扩散。较小的分子除了能进入大的孔外,还能进入较小的孔,而较大的分子只能进入较大的孔,甚至完全不能进入孔洞而先被洗提。因而尺寸大的分子先被洗提出来,尺寸小的分子较晚被洗提出来,分子尺寸按从大到小的次序进行分离。1、校准曲线得到的原始曲线是洗出体积又称保留体积与仪器响应值常用示差折光检测器。

  值越大意味着柱子效率越高。柱子性能的好坏不仅看柱子的效率,还需要注意柱子的分辨能力,一般都会采用分离度表示:··················如图所示的完全分离情形,此时应大于或等于,当小于时分离是不完全的。为了相对来说还是比较色谱柱的分离能力,定义比分离度,它表示分子量相差倍时的组分分离度,定义为:??????????????三、?主要仪器设施.仪器型凝胶色谱仪(带有示差折光检测装置,型号色谱管×),如图所示。凝胶色谱仪主要由输液系统、进样器、色谱柱(可分离分子量范围)、示差折光仪检测器、记录系统等组成。图型凝胶色谱仪.试剂质量分数为‰的聚苯乙烯溶液试样、一系列不同分子量的窄分布聚苯乙烯溶液、四氢呋喃。

  6、再用?目尼龙纱包好。、选择正真适合的的橡皮塞,中间打孔;、在橡皮塞顶部切出锅底状的,在??的头部切下长的一段,插入橡皮塞孔内,上部不允许超出橡皮塞的凹穴底面。剪尼龙网小圆片覆盖在上,用的尼龙纱将橡皮塞包好,插到玻璃管一端.、色谱柱下端用移液头部做,连接一细的,并用螺旋夹控制尼龙管的,另一端放入收集的收集器内③顶塞的制作:插入安装了玻璃管的橡皮塞④组装:将上述三者按相应位置组装成一个整体。⑤安装其他附属结构。)凝胶色谱柱填料的处理凝胶的选择:。方法:配置凝?胶悬浮液?:计算?并称取一?定量的凝?胶浸?泡于中?充分?溶胀后,?配成。凝胶色谱柱的装填方法①?固定:将色谱柱处置固定在支架上②装填:将一次性的缓慢倒入内。凝胶色谱柱的基本介绍

  7、吸附色谱有和等。分配色谱法利用固定液对不同组分分配性能的差异而使之分离的色谱法称为分配色谱法。分配色谱法有和等。离子交换色谱法是用离子交换树脂作固定相,利用树脂上离子交换基团对样品离子交换能力的差别而使之分离的色谱法称为离子交换色谱法。尺寸排阻色谱法用多孔凝胶作固定相,利用凝胶孔穴对不一样的尺寸的分子排阻效应的差别使之分离的色谱法称为尺寸排阻色谱法。亲和色谱法用具有生物活性的配位基(如抗体、酶等)键合到非活性载体或基质表面构成固定相,利用生物分子与固定相表面上配位基的专属亲和力使之分离的色谱法称为亲和色谱法。毛

  以及类似液体的密度(溶解能力强)的特点,利用超临界流体为萃取剂进行的萃取单元操作。其特点是安全、无毒、产品分离简单,但设备投资较大。简述凝胶色谱的分离原理?答:凝胶排阻色谱的分离介质(填料)具有均匀的网格结构,其分离原理是具有不一样分子量的溶质分子,在流经柱床是,由于大分子难以进入凝胶内部,而从凝胶颗粒之间流出,保留时间短;而小分子溶质能进入凝胶内部,由于凝胶多孔结构的阻滞作用,流经体积变大,保留时间延长。这样,分子量不同的溶质分子得以分离。膜分离过程中,有那些原因会造成膜污染,怎么样处理?答:膜污染主要有两种情况:一是附着层被滤饼、有机物凝胶、无机物水垢胶体物质或微生物等吸附

  仪器为东华大学分析测试中心溶剂为氘代二甲基亚砜一四甲基硅烷为内标。用‘谱和凝胶渗透色谱分析表征聚合物的结构和分子黝含芳酰胺键的新型甲壳型液晶高分子的合成及基本性质研究量。仪器为东华大学分析测试中心、凝胶渗透色谱仪测试时以聚苯乙烯为标样为溶剂。结果与讨论各种反应条件对选择性氧化反应结果的影响以样品为例通过对其进行高效液相色谱质谱联用测试分析得到表中的结果发现样品的液相色谱有三个基本峰保留时间均分别为、、对应的分子量分别为咖、咖和‖由此能够判断反应结束后的产物中除了甲基对苯二甲酸外可能还含有偏苯三甲酸、甲基邻苯二甲酸一和未反应完的原料。

  8、仪器为东华大学分析测试中心溶剂为氘代二甲基亚砜一四甲基硅烷为内标。用‘谱和凝胶渗透色谱分析表征聚合物的结构和分子黝含芳酰胺键的新型甲壳型液晶高分子的合成及基本性质研究量。仪器为东华大学分析测试中心、凝胶渗透色谱仪测试时以聚苯乙烯为标样为溶剂。结果与讨论各种反应条件对选择性氧化反应结果的影响以样品为例通过对其进行高效液相色谱质谱联用测试分析得到表中的结果发现样品的液相色谱有三个基本峰保留时间均分别为、、对应的分子量分别为咖、咖和‖由此能判断反应结束后的产物中除了甲基对苯二甲酸外可能还含有偏苯三甲酸、甲基邻苯二甲酸一和未反应完的原料。

  课题?血红蛋白的提取和分离【课题目标】本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离,使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法,并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基础原理,为今后学习运用这些技术打下基础。【课题重点与难点】课题重点:凝胶色谱法的原理和方法。课题难点:样品的预处理;色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。【导学思】思考?:分离生物大分子的基本思路是什么?思考?:蛋白质的分离和提取的原理是什么?思考?:?高温灭菌和酒精灭菌分别利用蛋白质的何种作用,作用结果是什么被破坏?思考?:人们用鸡的红细胞提取?,用人的红细胞提取血红蛋白的原因是什么?一。基础知识:㈠凝胶色

  9、离子交换色谱基础原理:组分在固定相上发生反复离子交换反应;组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大,保留时间长。离子对色谱原理:将一种(或多种)与溶质离子电荷相反的离子(对离子或反离子)加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物,使其能够在两相之间进行分配;尺寸排斥色谱原理:按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙,由其中通过,出峰最慢;中等分子只可以通过部分凝胶空隙,中速通过;而大分子被排斥在外,出峰最快;溶剂分子小,故在最后出峰。亲和色谱原理:利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力,进行选择性分离。液相色谱质谱联

  、逆流分配法:其固定相和流动相都放在一组特别的分配管中。三离子交换色谱:树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换,混合物中不同溶质对交换剂具有不一样的亲利力而将它们分离。四凝胶色谱:以凝胶为固定相,是一种根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术,因而又树为分子筛色谱。五亲和色谱:把与目的产物具有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相,可把目的产物从混合物中分离出来。如抗原与抗体,酶蛋白与辅酶。二、按固定相形状不同分类、柱色谱分离在柱中进行的色谱分离。优点:进样量大,回收容易。、纸上色谱分离以滤纸为载体的分配色谱。优点:设备简单,操作便捷,分离效率高,所需样品量少。

  商品中“””表示交联度,越小,交联度越大,吸水量也就越小。样品分离时,首先把经过充分溶胀的凝胶装入层析柱中,然后把样品加进凝胶柱,由于交联葡聚糖的三维空间网状的结构特性,分子量大的物质只是沿着凝胶颗粒间的孔隙随溶剂荡动,其流程短,移动速度快,先流出层析床。分子量小的物质由于不断进出微孔凝胶颗粒,流程长,移动速度慢,比分子量大的物质迟流出层析床,从而使样品中各组分按相对分子量大小得以分离。当两种以上不同分子量的分子均能进入凝胶颗粒内部时,则由于它们被排阻和扩散程度不同,在色谱柱内所经过的时间和路程不同,从而也得到分离。凝胶色谱分离原理示意图如图所示。三、试剂与仪器(一)试剂:醋酸

  用石油醚定容至,摇匀,作为标准储备溶液,浓度为,根据自身的需求再用石油醚稀释配成适当浓度的标准工作溶液;玉米油:不含甲氧滴滴涕。仪器气相色谱仪:配备电子俘获检测器;微量注射器:;干燥箱;旋转蒸发器;氮气:纯度≥;凝胶色谱柱:,内填树脂聚苯乙烯二乙烯聚苯或相当者,目,分子量范围≥,用前需用添加甲氧滴滴涕标准品的玉米油,做对应的流出曲线和添加回收率实验,以确定洗脱、收集条件;凝胶渗透色谱系统:由恒流泵,凝胶色谱柱及紫外检测器构成。校准流速为试样的抽取与制备检验批以不超过件为一检验批。同一检验批的商品应具有相同特征,如包装。标志、产地凝胶色谱柱的基本介绍

  10、测定聚合物分子量分布的方法主要有三种:利用聚合物溶解度的分子量依赖性,将试样分成分子量不同的级分,从而得到试样的分子量分布,例如沉淀分级法和梯度淋洗分级法。利用聚合物分子链在溶液中的分子运动性质得出分子量分布.例如:超速离心沉降法。利用聚合物体积的分子量依赖性得到分子量分布,例如:体积排除色谱法(或称为凝胶色谱法)。凝胶色谱法具有快速、精确、重复性好等优点,目前成为科研和工业生产领域测定聚合物分子量和分子量分布的主要方法。一、?实验目的和要求、了解凝胶渗透色谱的测量原理,初步掌握的进样、淋洗、接收、检测等操作技术。、掌握分子量分布曲线的分析方法,得到样品的数均分子量、重均分子量和多分散性指数。

  用玻璃棒迅速搅拌一段时间。【补充】:加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯的目的是溶解细胞膜,有利于血红蛋白的释放和分离。?如何除无机盐离子和小分子有机物质呢?透析。半透膜的选择透过性,大分子物质不能通过半透膜,离子和小分子可以通过半透膜。思考:为何使用??的磷酸缓冲液?为什么缓冲液量远多于血红蛋白溶液量?维持血红蛋白的正常特性。有利于杂质分子充分地向外扩散。?凝胶色谱分离蛋白质包括:制作色谱柱、装填色谱柱、样品加入和洗脱。根据教材图?,说出制作色谱柱需要的材料。色谱柱的制作的步骤:准备材料→加工橡皮塞→安装色谱柱凝胶色谱柱的装填。请阅读教材:色谱柱的装填

  其原理主要是(分子筛作用),根据凝胶的(孔径)和被分离化合物分子的(大小)而达到分离目的。.离子交换色谱主要基于混合物中各成分(解离度)差异进行分离。离子交换剂有(离子交换树脂)、(离子交换纤维素)和(离子交换凝胶)三种。.大孔树脂是一类没有(可解离基团),具有(多孔结构),(不溶于水)的固体高分子物质,它可以通过(物理吸附)有选择地吸附有机物质而达到分离的目的。.吸附色谱常用的吸附剂包括(硅胶)、(氧化铝)、(活性碳)和(聚酰胺)等。.分配色谱利用被分离成分在固定相和流动相之间的(分配系数)不同而达到分离。.分配色谱有(正相分配色谱)和(反相分配色谱)之分。

  【摘要】.轻轻摇匀后,垂直放℃水浴,后取出观察有无凝固。【结果观察】十十形成牢固凝胶,倒持安瓶凝胶不动。十形成凝胶,但不牢固,倒持安瓶凝胶能动。—不形成凝胶。凡结果阳性者表示内毒素阳性,本实验②为阳性对照,③...

  【摘要】样品的处理解析如果凝胶色谱柱装填得很成功、分离操作也正确的话能清楚地看到血红蛋白的红带均匀、狭窄、平整?随着洗脱液缓慢流出如果红带歪曲、散乱、变宽?说明分离的效果不好这与凝胶色谱柱的装填有关。...

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